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恒远生物|人羊膜细胞(WISH)培养建议
品牌: 恒远生物
货号: HYCC10347
中文名称: 人羊膜细胞；WISH
规格: T25
形态特性: 上皮细胞样
生长特性: 贴壁生长
特征特性: 最初以为这株细胞的起源是正常羊膜，但随后通过同工酶分析、HeLa标记染色体和DNA指纹法分析，证实该细胞是HeLa细胞污染的；角蛋白阳性。
培养条件: DMEM-H: Dulbecco＇s Modified Eagle＇s Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
传代方法: 1：2~1:4传代，每周2~3次。
冻存条件: 无血清细胞冻存液
一、细胞收到后处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的常见办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，处理完后放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶里面的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基），若是5%CO2的培养箱，可用密封培养瓶，拧紧瓶盖后放入5%CO2培养箱，48H内要换液一次。
二、细胞培养常见问题解答
1.培养基为什么一般都是偏红色?
因为培养基加了酚红来显示颜色，指示pH范围为6-8，颜色会由黄变为紫红。这是为了我们能更直观观察培养液的变化，如变黄，则代表偏酸，偏碱性了就显示偏紫色。一般来说，细胞吸收营养后，变黄后就暗示我们要换培养基啦!所以密切观察很重要哦!
2.细胞的居住环境
舒适无菌的环境是细胞健康生活的重要基础。如下图为培养细胞的器皿，包括形状、规格、用途多样的培养瓶、培养皿及培养板。最终住进37℃，5%CO2的恒温培养箱。
3.细胞培养皿和培养瓶区别?
就细胞培养状态来说，培养瓶和培养皿没有太大区别，主要在于安全系数(培养瓶>培养皿)、培养细胞数量(大培养瓶>培养皿)。但是培养瓶成本也会相对较高，因此无特殊要求，一般选择培养皿即可。
4.为什么细胞复苏后，很多难以贴壁?
忽略培养基的问题，主要考虑细胞冻存时状态差或者复苏时动作太慢导致细胞死亡。切记最重要的融化速度要快，可不时摇动冷冻管，使之尽快通过最易受损的温度段(-5～0℃)。
5.细胞冻存时对细胞量有要求吗?
细胞复苏时会有一定的细胞死亡，因此细胞的浓度应足够高，起始浓度106—107个/ml/管。
6.细胞污染怎么办?
如发现细胞有污染，一般建议丢弃。如果细胞非常宝贵，可试着加入含抗生素的培养基反复清洗，并用抗生素含量高的培养基培养，并经常更换培养基。
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