生化试剂盒
- 羧酸酯酶(CarE)试剂盒-微量法
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恒远生物生化试剂盒应用领域广泛，涉及酶类、氧化应激、铁死亡、肝功能、肾功能、糖酵解、无机盐离子、脂质代谢、植物抗逆性等。检测样本类型丰富，涉及多种体液、组织、细胞、食品、植物、药物、化妆品等。主要的检测仪器为酶标仪，分光光度计和荧光酶标仪。我们将以高度的责任感和出色的产品质量为客户提供高效专业的生化代测服务和实验技术解决方案。丰富的经验、优良的品质、充足的库存、准确的交货时间、极具竞争力的价格，所有这些保证了我们向您提供的最专业最优质的服务。
| 中文名称 |
羧酸酯酶(CarE)试剂盒-微量法 |
| 规格 | 96样 |
| 货号 |
L-737-SH |
| 价格 | ￥590 |
| 样本类型 | 血清，血浆，组织匀浆，细胞裂解液、细胞培养上清液等 |
| 检测范围 | 详见说明书 |
| 检测方法 |
微量法 |
| 货期 | 3-5天 |
| 说明书 | 咨询我司业务员获取 |
| 文献 | 咨询我司业务员获取 |
注 意 ：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
哺乳动物CarE，也称脂族酯酶（aliesterase），广泛分布于组织和器官，属于丝氨酸水解酶家族。CarE催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解，但不能催化水解乙酰胆碱及其类似物。CarE参与脂质运输和代谢，并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关，有机磷农药可结合并且抑制CarE活性。
注意：空白管只需测定一次。
CarE活性计算公式：
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1 组织中CarE活性
（1） 按蛋白浓度计算
CarE活性单位定义：每mg组织蛋白在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。
CarE酶活(U/mg prot)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总÷(Cpr×V样)÷T
= 13.67×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr
（2） 按样本鲜重计算
CarE活性单位定义：每g组织在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。
CarE酶活(U/g 鲜重)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总×（V样总÷V样）÷W÷T
=13.67×(△A测定管-△A空白管)÷W
2 细菌或细胞中CarE活性
CarE活性单位定义：每1万个细菌或细胞在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为一个CarE活性单位。
CarE酶活(U/104 cell)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总×（V样总÷V样）÷细胞密度（104 cell/mL）÷T=13.67×(△A测定管-△A空白管)÷细胞密度（104 cell/mL）
3. 液体中CarE活性
CarE活性单位定义：每毫升样品在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。
CarE酶活(U/mL )= (△A测定管-△A空白管) ×V反总÷V样÷T
=13.67×(△A测定管-△A空白管)
V反总：反应体系总体积，205μL=2.05×10-4L；V样总：上清液总体积，1 mL；V样：加入上清液体积(mL)，0.005 mL；Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量（g）；T：反应时间（min），3min。
b. 使用96孔板测定的计算公式如下
1 组织中CarE活性
（3） 按蛋白浓度计算
CarE活性单位定义：每mg组织蛋白在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。
CarE酶活(U/mg prot)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总÷(Cpr×V样)÷T
= 13.67×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr
（4） 按样本鲜重计算
CarE活性单位定义：每g组织在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。
CarE酶活(U/g 鲜重)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总×（V样总÷V样）÷W÷T
=13.67×(△A测定管-△A空白管)÷W
2 细菌或细胞中CarE活性
CarE活性单位定义：每1万个细菌或细胞在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为一个CarE活
性单位。
CarE酶活(U/104 cell)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总×（V样总÷V样）÷细胞密度（104 cell/mL）÷T=13.67×(△A测定管-△A空白管)÷细胞密度（104 cell/mL）
3. 液体中CarE活性
CarE活性单位定义：每毫升样品在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。
CarE酶活(U/mL )= (△A测定管-△A空白管) ×V反总÷V样÷T
=13.67×(△A测定管-△A空白管)
V反总：反应体系总体积，205μL=2.05×10-4L；V样总：上清液总体积，1 mL；V样：加入上清液体积(mL)，0.005 mL；Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量（g）；T：反应时间（min），3min。
测定原理：
CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固篮显色；在450 nm光吸收增加速率，计算CarE活性。
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。
试剂组成和配置：
试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体15mL×2瓶， 4℃保存；
试剂三：粉剂×2支， 4℃保存，临用前取1支试剂三，加0.6ml无水乙醇充分溶解；
试剂四：粉剂×2支，-20℃保存，临用前取1支试剂四，加少量试剂二溶解；
工作液配制：临用前配制，向1瓶试剂二中，加入溶解后的试剂三和试剂四各1支，充分溶解，过滤，4℃避光保存，可用1周。
粗酶液提取：
细菌、细胞样品制备
收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每200万细菌或细胞加入400μL试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000g 4℃离心30min，取上清液待测。
2、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆；12000g 4℃离心30min，取上清液待测。
3、液体：直接测定
测定操作：
1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到450 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二置于37℃水浴中预热30 min。
3. 空白管：取微量玻璃比色皿/96孔板，依次加入5μL蒸馏水和200μL试剂二，迅速混匀，于450nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A1，第190s吸光值记为A2。△A空白管=A2-A1
4. 测定管：取微量玻璃比色皿/96孔板，依次加入5μL上清液和200μL试剂二，迅速混匀，于450nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A3，第190s吸光值记为A4。△A测定管=A4-A3
注意：空白管只需测定一次。
CarE活性计算公式：
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1 组织中CarE活性
（1） 按蛋白浓度计算
CarE活性单位定义：每mg组织蛋白在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。
CarE酶活(U/mg prot)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总÷(Cpr×V样)÷T
= 13.67×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr
（2） 按样本鲜重计算
CarE活性单位定义：每g组织在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。
CarE酶活(U/g 鲜重)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总×（V样总÷V样）÷W÷T
=13.67×(△A测定管-△A空白管)÷W
2 细菌或细胞中CarE活性
CarE活性单位定义：每1万个细菌或细胞在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为一个CarE活性单位。
CarE酶活(U/104 cell)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总×（V样总÷V样）÷细胞密度（104 cell/mL）÷T=13.67×(△A测定管-△A空白管)÷细胞密度（104 cell/mL）
3. 液体中CarE活性
CarE活性单位定义：每毫升样品在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。
CarE酶活(U/mL )= (△A测定管-△A空白管) ×V反总÷V样÷T
=13.67×(△A测定管-△A空白管)
V反总：反应体系总体积，205μL=2.05×10-4L；V样总：上清液总体积，1 mL；V样：加入上清液体积(mL)，0.005 mL；Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量（g）；T：反应时间（min），3min。
b. 使用96孔板测定的计算公式如下
1 组织中CarE活性
（3） 按蛋白浓度计算
CarE活性单位定义：每mg组织蛋白在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。
CarE酶活(U/mg prot)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总÷(Cpr×V样)÷T
= 13.67×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr
（4） 按样本鲜重计算
CarE活性单位定义：每g组织在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。
CarE酶活(U/g 鲜重)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总×（V样总÷V样）÷W÷T
=13.67×(△A测定管-△A空白管)÷W
2 细菌或细胞中CarE活性
CarE活性单位定义：每1万个细菌或细胞在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为一个CarE活性单位。
CarE酶活(U/104 cell)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总×（V样总÷V样）÷细胞密度（104 cell/mL）÷T=13.67×(△A测定管-△A空白管)÷细胞密度（104 cell/mL）
3. 液体中CarE活性
CarE活性单位定义：每毫升样品在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。
CarE酶活(U/mL )= (△A测定管-△A空白管) ×V反总÷V样÷T
=13.67×(△A测定管-△A空白管)
V反总：反应体系总体积，205μL=2.05×10-4L；V样总：上清液总体积，1 mL；V样：加入上清液体积(mL)，0.005 mL；Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量（g）；T：反应时间（min），3min。
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