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Abcam抗体稀释度的选择与优化方法
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使用何种稀释度
抗体和抗原间的结合率取决于亲和常数。亲和常数可受到温度、pH和缓冲液成分的影响。改变溶液中抗体和抗原的相对浓度也可控制抗体-抗原复合物形成的程度。由于通常无法改变抗原的浓度，因此必须针对每种应用和每组实验条件确定各抗体的最佳工作浓度(稀释度)。
许多Abcam抗体在数据表都有列出不同实验的推荐稀释度。我们推荐尝试用这些稀释度开始实验。但是，这些稀释度可能需要进行某些优化。
优化抗体稀释度：滴定实验
zui佳滴度或稀释度为在最少背景/非特异性结合的情况下得到最佳染色效果的浓度(稀释度)。必须通过实验确定每次测定的最佳抗体浓度。通常通过在滴定实验中使用一系列稀释度来确定。
当实验室收到一种新抗体时，建议尝试用滴定实验确定最佳抗体稀释度以获得最佳结果。
要进行滴定实验，首先要选择固定的孵育时间。然后制备一系列实验稀释度的抗体以备测试。每种稀释度应针对相同类型的样品进行测试，以保持实验条件标准化。
许多抗体批间性能差别不大，因此您只需要进行一次滴定实验。但是，多克隆抗血清抗体浓度在不同动物间或不同血清采集时间可能显著不同。在这些情况下，或者当您注意到任何抗体的批次间染色结果有变化时，我们推荐再次对该瓶抗体进行滴定实验以获得最佳浓度。
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