乙酰胆碱酯酶(AchE)试剂盒-可见分光光度法-上海恒远生物科技有限公司

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生化试剂盒

乙酰胆碱酯酶(AchE)试剂盒-可见分光光度法: 恒远生物生化试剂盒应用领域广泛，涉及酶类、氧化应激、铁死亡、肝功能、肾功能、糖酵解、无机盐离子、脂质代谢、植物抗逆性等。检测样本类型丰富，涉及多种体液、组织、细胞、食品、植物、药物、化妆品等。主要的检测仪器为酶标仪，分光光度计和荧光酶标仪。我们将以高度的责任感和出色的产品质量为客户提供高效专业的生化代测服务和实验技术解决方案。丰富的经验、优良的品质、充足的库存、准确的交货时间、极具竞争力的价格，所有这些保证了我们向您提供的最专业最优质的服务。

产品详情相关产品

中文名称	乙酰胆碱酯酶(AchE)试剂盒-可见分光光度法
规格	48样
货号	L-734-SH
价格	￥200
样本类型	血清，血浆，组织匀浆，细胞裂解液、细胞培养上清液等
检测范围	详见说明书
检测方法	可见分光光度法
货期	3-5天
说明书	咨询我司业务员获取
文献	咨询我司业务员获取

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

AchE属于丝氨酸水解酶，广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE催化乙酰胆碱（Ach）水解，在神经传导调节中起重要作用。

测定原理：

AchE催化Ach水解生成胆碱，胆碱与二硫对硝基苯甲酸（DTNB）作用生成5-巯基-硝基苯甲酸（TNB）；TNB在412nm处有吸收峰，通过测定412 nm吸光度增加速率，计算AchE活性。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入2.6mL试剂一，充分震荡溶解。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入2.6mL试剂一，充分震荡溶解。

粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清液待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体：直接测定。

测定操作：

1. 分光光度计预热30 min，调节波长到412 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二置于37℃水浴中预热30min。

3. 取1mL玻璃比色皿，依次加入100μL上清液、800 μL试剂一、50μL试剂二和50 μL试剂三，迅速混匀，于412nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A1，第190s吸光值记为A2。△A测定管=A2-A1。

AchE活性计算公式：

1. 组织AchE活性

（1）按照蛋白浓度计算

活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。

AchE酶活(nmol/min/mg prot)= (△A÷ε÷d×V反总×10⁹)÷（Cpr ×V样）÷T

= 245×△A÷Cpr

（2）按照样本质量计算

活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。

AchE酶活(nmol/min/g鲜重)= (△A÷ε÷d×V反总×10⁹)÷（W ×V样÷V样总）÷T

= 245×△A÷W

1. 细菌、细胞AchE活性

活性单位定义：每10⁴个细胞每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。

AchE酶活(nmol/min/10⁴ cell)= (△A÷ε÷d×V反总×10⁹)÷（细胞数量×V样÷V样总）÷T

= 245×△A÷细胞数量

2. 血清AchE活性

活性单位定义：每毫升血清每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。

AchE酶活(nmol/min /mL)= (△A÷ε÷d×V反总×10⁹)÷V样÷T

=245×△A

ε：TNB摩尔消光系数，13.6×10³ L/mol/cm；V反总：反应体系总体积（L），1 mL=0.001 L；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：蛋白浓度（mg/mL）；W：样本质量，g；V样：加入上清液体积（mL），0.1 mL；T：反应时间（min），3 min。