生化试剂盒
- 乙酰胆碱酯酶(AchE)试剂盒-微量法
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恒远生物生化试剂盒应用领域广泛，涉及酶类、氧化应激、铁死亡、肝功能、肾功能、糖酵解、无机盐离子、脂质代谢、植物抗逆性等。检测样本类型丰富，涉及多种体液、组织、细胞、食品、植物、药物、化妆品等。主要的检测仪器为酶标仪，分光光度计和荧光酶标仪。我们将以高度的责任感和出色的产品质量为客户提供高效专业的生化代测服务和实验技术解决方案。丰富的经验、优良的品质、充足的库存、准确的交货时间、极具竞争力的价格，所有这些保证了我们向您提供的最专业最优质的服务。
| 中文名称 |
乙酰胆碱酯酶(AchE)试剂盒-微量法 |
| 规格 | 96样 |
| 货号 |
L-735-SH |
| 价格 | ￥380 |
| 样本类型 | 血清，血浆，组织匀浆，细胞裂解液、细胞培养上清液等 |
| 检测范围 | 详见说明书 |
| 检测方法 |
微量法 |
| 货期 | 3-5天 |
| 说明书 | 咨询我司业务员获取 |
| 文献 | 咨询我司业务员获取 |
注 意 ：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
AchE属于丝氨酸水解酶，广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE催化乙酰胆碱（Ach）水解，在神经传导调节中起重要作用。
测定原理：
AchE催化Ach水解生成胆碱，胆碱与二硫对硝基苯甲酸（DTNB）作用生成5-巯基-硝基苯甲酸（TNB）；TNB在412nm处有吸收峰，通过测定412 nm吸光度增加速率，计算AchE活性。
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1支，4℃保存。临用前加入1.3 mL试剂二，充分震荡溶解。
试剂四：粉剂×1支，4℃保存。临用前加入1.3 mL试剂二，充分震荡溶解。
粗酶液提取：
组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清液待测。
细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
血清等液体：直接测定。
测定操作：
1. 分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到412 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二置于37℃水浴中预热30min。
3. 取微量石英比色皿/96孔板，依次加入20μL上清液、160 μL试剂二、10μL试剂三和10μL试剂四，迅速混匀，于412nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A1，第190s吸光值记为A2。△A测定管=A2-A1。
AchE活性计算：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
组织AchE活性
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。
AchE酶活(nmol/min/mg prot)= (△A÷ε÷d×V反总×109)÷（Cpr ×V样）÷T
= 245×△A÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。
AchE酶活(nmol/min/g 鲜重)= (△A÷ε÷d×V反总×109)÷（W ×V样÷V样总）÷T
= 245×△A÷W
细菌、细胞AchE活性
活性单位定义：每104个细胞每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。
AchE酶活(nmol/min/104 cell)= (△A÷ε÷d×V反总×109)÷（细胞数量×V样÷V样总）÷T
= 245×△A÷细胞数量
血清AchE活性
活性单位定义：每毫升血清每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。
AchE酶活(nmol/min /mL)= (△A÷ε÷d×V反总×109)÷V样÷T
=245×△A
ε：TNB摩尔消光系数，13.6×103 L/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V反总：反应体系总体积（L），200μL=2×10-4L；V样总：提取液体积，1 mL；106：1mol=1×106μmol；Cpr：蛋白浓度（mg/mL）；V样：加入上清液体积（mL），0.02 mL；W ：样品质量；T：反应时间（min），3 min。
b.使用96孔板测定的计算公式如下
1. 组织AchE活性
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。
AchE酶活(nmol/min/mg prot)= (△A÷ε÷d×V反总×109)÷（Cpr ×V样）÷T
= 490×△A÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。
AchE酶活(nmol/min/g 鲜重)= (△A÷ε÷d×V反总×109)÷（W ×V样÷V样总）÷T
= 490×△A÷W
2. 细菌、细胞AchE活性
活性单位定义：每104个细胞每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。
AchE酶活(nmol/min/104 cell)= (△A÷ε÷d×V反总×109)÷（细胞数量×V样÷V样总）÷T
= 490×△A÷细胞数量
3. 血清AchE活性
活性单位定义：每毫升血清每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。
AchE酶活(nmol/min /mL)= (△A÷ε÷d×V反总×109)÷V样÷T
=490×△A
ε：TNB摩尔消光系数，13.6×103 L/mol/cm；d：96孔板光径，0.5 cm；V反总：反应体系总体积（L），200μL=2×10-4L；V样总：提取液体积，1 mL；106：1mol=1×106μmol；Cpr：蛋白浓度（mg/mL）；V样：加入上清液体积（mL），0.02 mL；W ：样品质量；T：反应时间（min），3 min。
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