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生化试剂盒

α-淀粉酶试剂盒-可见分光光度法

测定原理:

还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质β-淀粉酶不耐热,在70℃钝化15min,从而定α-淀粉酶活性

中文名称 α-淀粉酶试剂盒
规格 24样
货号 E-363-SH


价格 ¥230
样本类型 血清,血浆,组织匀浆,细胞裂解液、细胞培养上清液等
检测范围 详见说明书
检测方法 可见分光光度法
货期 3-5天
说明书 咨询我司业务员获取
文献 咨询我司业务员获取

    正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

淀粉酶负责水解淀粉,包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉的粘度降低,因此又称为液化酶。


测定原理:

还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质β-淀粉酶不耐热,在70℃钝化15min,从而定α-淀粉酶活性


自备的仪器和用品

可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、玻璃比色皿、研钵蒸馏水


试剂的组成和配制:

试剂一:25mL×1瓶,常温保存,若有黄色晶体析出,需90℃加热溶解后再用

试剂二:20mL×1瓶,4℃保存,若有沉淀析出,需70℃加热溶解后再用。


粗酶液提取

组织:称取0.1~0.2g样本(建议称取约0.1g样本,加1 mL蒸馏水匀浆;将匀浆倒入离心管中,在室温下放置提取15min,每隔5min振荡1次,使其充分提取;3000g25℃离心10min,吸取上清液并且加蒸馏水定容至10 mL,摇匀,即为淀粉酶原液。

血清(浆):直接检测。

操作步骤和加样表(在1.5mLEP管中依次加入下列试剂) 

1、 分光光度计预热30min以上,调节波长到540 nm,蒸馏水调零。

2、 试剂一或试剂二40℃预热10min

3、测定步骤

试剂(μL

对照管

测定管

α淀粉酶原液

250

250

70℃水浴15min左右冷却

蒸馏水

250

 

试剂二

 

250

40℃恒温水浴中准确保温5min

试剂一

500

500

混匀,95℃水浴5min,冷却, 540nm处读取对照管和测定管吸光度计算ΔA=A测定管-A对照管。


α-淀粉酶活性计算:

1、标准条件下测定回归曲线为y=3.7215x -0.1778 x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。

2α淀粉酶活性

 

1)按照样质量计算

单位定义:每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

α淀粉酶活性(mg/min/g鲜重)=[(ΔA0.1778)÷3.7215×V反总]÷(W×V÷V样总)÷T=1.075×(ΔA0.1778)÷W

2)按照蛋白质含量计算

单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。

α淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(ΔA0.1778)÷3.7215×V反总]÷V×Cpr)÷T=0.1075×(ΔA0.1778) ÷Cpr

3血清(浆)样本中α淀粉酶活性计算

单位定义:每mL血清(浆)每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。

α淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(ΔA0.1778)÷3.7215×V反总]÷V÷T=0.1075×(ΔA0.1778) 

V反总:反应体系总体积,0.5mLV样:加入反应体系中样本体积,0.25 mLV样总:提取液总体积,10 mL Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,gT:反应时间,5min

 

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